名稱:犬補體片斷3aELISA試劑盒
試劑的準備:按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖應用pH計測量校正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
加樣:在ELISA中一般有3次加樣步驟,即加標本、加酶結合物,加底物。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。加標本一般用微量加樣器,按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以免發生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可再試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然后在微型振蕩器上震蕩1分鐘以保證混合。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。
名稱:犬補體片斷3aELISA試劑盒
保溫:在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物??乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。
ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相結合的機會,只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育。
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