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ELISA包被時我們通常使用PH9.6的緩沖液的原因是什么呀,為什么不用中性或酸性的包被液呢。
包被緩沖液的選擇要依靠你所包被的物質而定,沒有絕對的選擇,但有一個原則就是要盡可能的保持包被物的活性不被損失.目前常用的包被緩沖液有PBS,CBS,tris鹽緩沖液,咪脞緩沖液等,一般來說,緩沖液的pH要大于蛋白質的pI,以保持其活性.
堿性包被液如碳緩用的較多,尤其是在小分子和載體蛋白的偶聯物的包被,其主要的優勢在于堿性環境可以使蛋白更容易的與板子結合。
也有用PBS和檸檬酸緩的,但是比較少見,
碳緩效果很好,又易于配置,所以CC用的最多??!
為什么緩沖液的PH大于蛋白的PI包被效果好呢,跟蛋白的帶電荷情況有沒有關系,
蛋白和聚苯乙烯板子結合的詳細過程目前上不是很明了,目前認為是通過靜電吸附在板子上的,而聚苯乙烯板子一般在出廠前也要經過強電廠處理以提高吸附能力!肯定和蛋白的帶電情況有關,包被緩沖液并不一定都是PH9.6 的CB,不同的蛋白選用不同的包被緩沖液可以得最佳的包被效果,從上面可以看出和蛋白的帶電情況有明顯的相關性!