ELISA包被

發布時間： 2022-01-14　　點擊次數： 63次

ELISA包被時我們通常使用PH9.6的緩沖液的原因是什么呀，為什么不用中性或酸性的包被液呢。

包被緩沖液的選擇要依靠你所包被的物質而定,沒有絕對的選擇,但有一個原則就是要盡可能的保持包被物的活性不被損失.目前常用的包被緩沖液有PBS,CBS,tris鹽緩沖液,咪脞緩沖液等,一般來說,緩沖液的pH要大于蛋白質的pI,以保持其活性.

堿性包被液如碳緩用的較多，尤其是在小分子和載體蛋白的偶聯物的包被，其主要的優勢在于堿性環境可以使蛋白更容易的與板子結合。
也有用PBS和檸檬酸緩的，但是比較少見，
碳緩效果很好，又易于配置，所以CC用的最多??！

為什么緩沖液的PH大于蛋白的PI包被效果好呢，跟蛋白的帶電荷情況有沒有關系，

蛋白和聚苯乙烯板子結合的詳細過程目前上不是很明了，目前認為是通過靜電吸附在板子上的，而聚苯乙烯板子一般在出廠前也要經過強電廠處理以提高吸附能力！肯定和蛋白的帶電情況有關，包被緩沖液并不一定都是PH9.6 的CB，不同的蛋白選用不同的包被緩沖液可以得最佳的包被效果，從上面可以看出和蛋白的帶電情況有明顯的相關性！

為什么緩沖液的PH要大于包被蛋白的PI，原因有兩點：
一是因為蛋白質與酶標板的結合主要是靠疏水作用的物理吸附。而緩沖液的PH略大于包被蛋白的PI，有利于蛋白質疏水鍵的適當暴露。二是因為酶標板聚苯乙烯表面暴露的主要是C－H鍵，而緩沖液的PH略大于包被蛋白的PI，可以使蛋白質帶上負電荷，有利于蛋白質與酶標板的牢固結合，提高包被效率。所以我們常用的包被液體多位PH9.6的碳酸氫鈉緩沖液，當然對PI低的蛋白質也有使用PH7.4的包被液的情況。
（蛋白質等電點的英文縮寫是PI。　　蛋白質在溶液中有兩性電離現象。假設某一溶液中含有一種蛋白質。當PI=PH時該蛋白質極性基團解離的正負離子數相等，凈電荷為0，此時的該溶液的是PH值是該蛋白質的PI值。某一蛋白質的PI大小是特定的,與該蛋白質結構有關，而與環境PH無關?！　≡谀骋籔H溶液中當PH＞PI時該蛋白質帶負電荷。反之PH＜PI時該蛋白質帶正電荷。PH=PI時該蛋白質不帶電荷　　人體內PH=7.4；而體內大部分蛋白質的 PI＜6；所以人體內大部分蛋白質帶負電荷）

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